麻豆视频免费在线-麻豆视频免费网站-麻豆视频免费观看-麻豆视频免费播放-佐佐木明希与黑人在线播放-佐佐木明希黑人经典作品推荐

歡迎來到武漢普諾賽生命科技有限公司網(wǎng)站!
咨詢熱線

400-999-2100

當(dāng)前位置:首頁(yè)  >  技術(shù)文章  >  細(xì)胞學(xué)堂 | 一文掌握骨髓來源巨噬細(xì)胞分離提取和培養(yǎng)

細(xì)胞學(xué)堂 | 一文掌握骨髓來源巨噬細(xì)胞分離提取和培養(yǎng)

更新時(shí)間:2024-11-07  |  點(diǎn)擊率:1461

巨噬細(xì)胞(Macrophages)是一種位于組織內(nèi)的白血球,源自單核細(xì)胞,單核細(xì)胞來源于骨髓中的前體細(xì)胞。巨噬細(xì)胞在生物體內(nèi)扮演著多重角色,它們可以吞噬和清除異物和衰老死亡細(xì)胞、分泌生物活性物質(zhì)、調(diào)節(jié)血細(xì)胞生成和參與免疫應(yīng)答等,是一類在體內(nèi)發(fā)揮重要免疫效應(yīng)的細(xì)胞,并且也是實(shí)驗(yàn)室最-常用的細(xì)胞種類之一。


骨髓來源巨噬細(xì)胞(Bone Marrow Derived Macrophage)是從大鼠或者其他哺乳動(dòng)物骨髓中的單個(gè)核細(xì)胞經(jīng)細(xì)胞因子誘導(dǎo)分化得到的一種原代巨噬細(xì)胞。本期,我們將以大鼠為例,分享骨髓來源巨噬細(xì)胞分離提取和培養(yǎng)注意事項(xiàng),幫助您順利上手開展實(shí)驗(yàn)。

 分離提取步驟


一、分離脛骨和股骨



01

取2周齡的健康大鼠,斷頸法處死;

02

用超純水清洗大鼠2次,再用75%酒精浸泡5 min,進(jìn)行表面除菌處理;

03

將消毒后的動(dòng)物轉(zhuǎn)運(yùn)至超凈工作臺(tái)內(nèi);

04

無(wú)菌條件下,用第一套無(wú)菌剪刀和鑷子剪開腿部皮膚,充分暴露兩側(cè)股骨;

05

更換第二套無(wú)菌剪刀和鑷子,從大腿根部關(guān)節(jié)處和腳后跟關(guān)節(jié)處剪斷,分離腿部肌肉,取出脛骨和股骨,將其放在含有PBS的培養(yǎng)皿內(nèi)。

圖片

圖1. 分離的脛骨和股骨



二、沖洗骨髓


01

更換第三套無(wú)菌剪刀和鑷子,清理脛骨和股骨表面殘留的肌肉組織,注意保證骨頭完整;

02

留取純凈骨頭,將其轉(zhuǎn)移至新的含有PBS的培養(yǎng)皿內(nèi);

03

取一個(gè)新培養(yǎng)皿,加10 mL大鼠骨髓來源巨噬細(xì)胞完-全培養(yǎng)基(貨號(hào)CM-R141)備用;

04

更換第四套無(wú)菌剪刀和鑷子,先用鑷子固定骨頭,再用無(wú)菌剪刀剪下骨頭兩端;

05

用注射器吸取培養(yǎng)皿內(nèi)的完-全培養(yǎng)基,從骨頭一端插入針頭,反復(fù)沖洗骨髓至骨頭發(fā)白透亮,將骨髓液收集在培養(yǎng)皿內(nèi);

06

用5 mL移液槍反復(fù)吹打骨髓液,將骨髓液經(jīng)200目細(xì)胞篩過濾,濾液收集于離心管內(nèi),離心棄上清,獲得骨髓細(xì)胞沉淀。

圖片

圖2. 注射器沖洗骨髓



三、巨噬細(xì)胞誘導(dǎo)分化


用含M-CSF(巨噬細(xì)胞集落刺激因子)的培養(yǎng)基刺激骨髓單個(gè)核細(xì)胞分化為巨噬細(xì)胞。

M-CSF有兩種獲取方式:

01

購(gòu)買商品化的M-CSF因子(推薦貨號(hào):PCK042、PCK043、PCK044、PCK303。M-CSF的常用濃度范圍為10-50 ng/mL,不同品牌的細(xì)胞因子使用濃度可能有所差異,需根據(jù)實(shí)際誘導(dǎo)效果調(diào)整使用濃度;

02

使用培養(yǎng)5-7天的L-929細(xì)胞上清[1]。將獲得的L-929細(xì)胞培養(yǎng)上清高速離心除雜,分裝后置于-20℃冷凍保存。通常使用含有20% L-929細(xì)胞上清的完-全培養(yǎng)基進(jìn)行誘導(dǎo),同時(shí)可根據(jù)實(shí)際誘導(dǎo)效果,調(diào)整L-929細(xì)胞上清的含量。

圖片

圖3. 誘導(dǎo)完成的骨髓來源巨噬細(xì)胞




細(xì)胞培養(yǎng)注意事項(xiàng)

骨髓來源巨噬細(xì)胞體外培養(yǎng)不增殖,需注意培養(yǎng)時(shí)間,建議盡快進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn);

骨髓來源巨噬細(xì)胞難消化,可用利多-卡因消化3 min左右(不建議超過5min),若細(xì)胞仍無(wú)法消化,更換消化液為0.25%胰蛋白酶,或使用無(wú)菌細(xì)胞刮。


參考文獻(xiàn)

[1] 

de Brito Monteiro L, Davanzo G G, de Aguiar C F, et al. M-CSF-and L929-derived macrophages present distinct metabolic profiles with similar inflammatory outcomes[J]. Immunobiology, 2020, 225(3): 151935.



主站蜘蛛池模板: 手机在线免费不卡一区二 | 久久精品福利视频 | 99国产在线观看 | 欧美片网站yy | 国产精品欧美在线 | 亚洲日本欧美产综合在线 | va视频在线观看 | 自拍偷拍首页 | 亚洲大尺度在线观看 | 日韩毛片网 | 欧州色 | 色婷婷精品视频 | 日本欧美大码a在线视频播放 | 国产精品俺来也在线观看了 | 一个色综合高清在线观看 | 91视频免费看 | 四虎影视永久在线精品免费 | 国产又长又粗又爽免费视频 | 99爱视频在线 | 四虎影视4hutv最新地址在线 | 日韩孕妇孕交在线视频 | 日韩欧美综合在线二区三区 | 99热这里只有精品国产免费 | 日本www色视频 | 久久久久久国产精品三级 | 美女一级毛片免费不卡视频 | 久久国产精品99久久久久久老狼 | xx中文字幕乱偷avxx | 私色综合网| 免费人成网站在线高清 | 欧美日韩福利视频一区二区三区 | 国语精品91自产拍在线观看二区 | 亚洲mv大片欧洲mv大片 | 亚洲国产三级在线观看 | 本道久久综合88全国最大色 | 精品国产一区在线观看 | 免费看隐私男生网站 | 亚洲国产欧美日韩一区二区 | 天天夜碰日日摸日日澡 | 日韩精品一区二区三区免费视频 | 毛片在线不卡 |