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細(xì)胞學(xué)堂 | 細(xì)胞培養(yǎng)中的小黑點(diǎn),原來是它

更新時(shí)間:2024-01-29  |  點(diǎn)擊率:1807


提起細(xì)胞培養(yǎng),相信很多老師都遇到過培養(yǎng)液中的“小黑點(diǎn)",因無法確定它的身份而頭痛不已。本期細(xì)胞學(xué)堂將為大家揭秘這些黑點(diǎn)究竟是什么,幫助您快速上手開展實(shí)驗(yàn)。


01


血清沉淀


血清在融解過程中會(huì)產(chǎn)生大量的析出物,呈現(xiàn)出小顆粒樣的東西,甚至呈纖維樣,這是由于血清融解后導(dǎo)致的蛋白、鹽類物質(zhì)的析出。





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血清融解時(shí)混勻              血清靜置融解不混勻,出現(xiàn)黑點(diǎn)


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顯微鏡下的血清沉淀物

影響因素

通常血清析出物的多少與融解方法有關(guān)。通過4℃冰箱解凍和溶解過程持續(xù)搖晃混勻,可以有效避免沉淀產(chǎn)生,而37℃靜置混勻則會(huì)有較多沉淀物析出。

處理方法

血清沉淀產(chǎn)生后應(yīng)離心去除部分沉淀,否則在培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)會(huì)看到較多黑點(diǎn)和雜質(zhì)類物質(zhì),影響判斷。




02


細(xì)胞碎片或者分泌物


在細(xì)胞代謝過程中,細(xì)胞凋亡后會(huì)產(chǎn)生一些分泌物的沉積和碎片物質(zhì),在顯微鏡下呈黑點(diǎn)狀。

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顯微鏡下的細(xì)胞碎片及分泌物

特征

細(xì)胞碎片大小不均一,會(huì)隨著培養(yǎng)時(shí)間少量增多,但是不會(huì)呈倍增的趨勢(shì)增多;

細(xì)胞狀態(tài)差時(shí)碎片會(huì)較多,狀態(tài)變好后黑點(diǎn)減少

細(xì)胞分泌物情況根據(jù)細(xì)胞有區(qū)別,有的細(xì)胞不產(chǎn)生分泌物,有的細(xì)胞會(huì)有較多的分泌物,往往是不影響細(xì)胞形態(tài)和增殖速度




03


外源微生物污染


當(dāng)細(xì)胞被支原體、黑膠蟲或者細(xì)菌污染時(shí),往往也會(huì)產(chǎn)生很多小黑點(diǎn),尤其是細(xì)菌污染的情況出現(xiàn)時(shí),這些小黑點(diǎn)甚至?xí)?dǎo)致培養(yǎng)液渾濁。

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細(xì)胞支原體污染,黑點(diǎn)較多


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細(xì)胞加入支原體清除試劑第二天,黑點(diǎn)顯著變少





如何區(qū)分是否為污染?

1

外源微生物污染

支原體和黑膠蟲污染一般表現(xiàn)為黑點(diǎn)增多并伴隨細(xì)胞生長(zhǎng)速度變慢、死細(xì)胞增多等現(xiàn)象,通常加入對(duì)應(yīng)清除試劑后細(xì)胞狀態(tài)會(huì)有顯著改善。

2

細(xì)胞分泌物/細(xì)胞碎片

細(xì)胞分泌物和細(xì)胞碎片則不會(huì)因?yàn)榧尤肭宄噭┖蠖纳疲瑫?huì)持續(xù)存在且不影響細(xì)胞增長(zhǎng)。





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