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直播答疑 | 細(xì)胞培養(yǎng)答疑專場(chǎng)

更新時(shí)間:2023-12-28  |  點(diǎn)擊率:702
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12月14日的直播中,普諾賽直播間為大家介紹了細(xì)胞黑點(diǎn)、細(xì)胞狀態(tài)變形、細(xì)胞空泡、聚團(tuán)、脫落等常見問題,直播回放請(qǐng)至B站 -“普諾賽生物"進(jìn)行觀看。本期直播答疑,從直播間提問中,篩選出部分有代表性的問題,做了詳細(xì)解答。如有其他問題,也歡迎大家在公眾號(hào)留言,我們將在線解答。


消化時(shí)間過長(zhǎng)會(huì)損傷細(xì)胞嗎?

消化時(shí)間過長(zhǎng)會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞膜蛋白的改變,最直觀的表現(xiàn)就是消化后第二天漂浮細(xì)胞很多或者貼壁慢。

胰酶消化不掉的,二次消化對(duì)細(xì)胞損傷

小還是機(jī)械吹打?qū)?xì)胞損傷小?

建議二次消化。細(xì)胞與細(xì)胞間的連接沒有通過酶切開的話,用移液槍進(jìn)行吹散后細(xì)胞會(huì)被撕裂,直接導(dǎo)致細(xì)胞不貼壁甚至死亡。

懸浮細(xì)胞聚團(tuán)怎么處理?

懸浮細(xì)胞聚團(tuán),要分情況進(jìn)行處理:

? 原本就是聚團(tuán)生長(zhǎng)的細(xì)胞,不用干預(yù),比如NK-92等就是聚團(tuán)生長(zhǎng);

? 如果是非聚團(tuán)生長(zhǎng)的細(xì)胞,比如THP-1聚團(tuán)了,要區(qū)分高密度和低密度。高密度可以輕輕吹散細(xì)胞后進(jìn)行低速離心,去除里面夾雜的死細(xì)胞,正常傳代即可改善;

? 非聚團(tuán)生長(zhǎng)的細(xì)胞低密度時(shí),聚團(tuán)一般是細(xì)胞狀態(tài)不太好,需要調(diào)整狀態(tài)。排查是否有污染以及培養(yǎng)環(huán)境合不合適等問題,對(duì)癥改善后細(xì)胞即可正常生長(zhǎng),聚團(tuán)改善;

? 剛復(fù)蘇的懸浮細(xì)胞也會(huì)出現(xiàn)聚團(tuán),一般是靜置培養(yǎng)和少動(dòng),期間可以用補(bǔ)液和半換液的方式培養(yǎng),等細(xì)胞密度長(zhǎng)起來,生長(zhǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期時(shí),團(tuán)塊問題也會(huì)改善。

培養(yǎng)細(xì)胞系有很多無規(guī)則運(yùn)動(dòng)的小黑點(diǎn),

培養(yǎng)基未渾濁、變黃,細(xì)胞生長(zhǎng)速度不

變,形態(tài)變化不大。請(qǐng)問這是什么污染?

這個(gè)情況比較符合血清沉淀或者細(xì)胞碎片分泌物之類的,一般不用過于關(guān)注,細(xì)胞能夠茁壯生長(zhǎng)就可以了。

豬肺泡巨噬細(xì)胞做實(shí)驗(yàn),一般可以傳多

少代以內(nèi)?

如果是豬的肺組織提取的原代巨噬細(xì)胞,一般是終末分化的細(xì)胞,是不能增殖的,只能轉(zhuǎn)移到孔板做實(shí)驗(yàn)。

要收集細(xì)胞分泌的蛋白時(shí),培養(yǎng)基中加

不加FBS?應(yīng)該怎么選擇?

一般要做分泌蛋白都是不建議加血清的。血清里面可能有一些蛋白類未知成分,不排除會(huì)和實(shí)驗(yàn)的目標(biāo)蛋白有反應(yīng)或者類似,所以通常都是用的無血清。

提取的原代細(xì)胞不貼壁,怎么辦?

原代組織分離后體外培養(yǎng)通常會(huì)有類似的問題,需要選擇合適的包被試劑進(jìn)行輔助貼壁,這是原代提取比較常見的操作。

如果對(duì)細(xì)胞的均勻度要求很高,有沒有

好的方法可以提高鋪板時(shí)細(xì)胞的分布勻度?

首先是細(xì)胞消化后盡量成單顆,鋪板的時(shí)候需要練習(xí)下手法,不要有旋渦產(chǎn)生,導(dǎo)致分布不均勻;除開鋪板手法外,細(xì)胞本身特性導(dǎo)致的容易聚團(tuán)生長(zhǎng),可以嘗試包被培養(yǎng)瓶以后低密度接種細(xì)胞,可能會(huì)達(dá)到比較好的單層貼壁的情況。

消化時(shí)胰酶要預(yù)溫嗎?水浴鍋預(yù)溫可以嗎?

胰蛋白酶屬于酶制品,受溫度影響,反復(fù)的4℃- 37℃的溫度波動(dòng)反而會(huì)導(dǎo)致酶失活,效果不好,所以不建議37℃復(fù)溫。4℃拿出來可以直接用,加入到細(xì)胞消化的時(shí)候放進(jìn)培養(yǎng)箱就好了。

我養(yǎng)的上皮細(xì)胞消化下來有很多像葡萄串

一樣的細(xì)胞團(tuán),吹打也不能讓細(xì)胞分開。

這種情況一般還是消化不充分導(dǎo)致,建議可以適當(dāng)延長(zhǎng)消化時(shí)間,待細(xì)胞與細(xì)胞間的連接打開后再進(jìn)行吹散,一般是很容易吹散的。





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