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細(xì)胞學(xué)堂 | 脫落的293T細(xì)胞如何恢復(fù)正常

更新時(shí)間:2023-02-16  |  點(diǎn)擊率:1239





293T [HEK-293T](人胚腎細(xì)胞)是293 [HEK-293]細(xì)胞株插入了SV40 T-antigen的溫度敏感基因形成的高轉(zhuǎn)衍生株。該細(xì)胞廣泛應(yīng)用于病毒包裝,因其比較容易轉(zhuǎn)染,也是常用的表達(dá)研究外源基因的細(xì)胞株。

圖1. 293T正常生長(zhǎng)圖片


該細(xì)胞因?yàn)橘N壁松散,若購(gòu)買常溫細(xì)胞,收貨時(shí)有可能大部分細(xì)胞脫離培養(yǎng)瓶壁,顯微鏡下找不到細(xì)胞,只能看到肉眼可見的細(xì)胞團(tuán),是正常現(xiàn)象(如圖2)。


圖片

圖2. 293T收貨聚團(tuán)(圖由客戶提供,僅供學(xué)習(xí)參考)


參照以下方式處理即可恢復(fù)正常:

1

收到細(xì)胞后請(qǐng)先置于培養(yǎng)箱中穩(wěn)定2 ~ 4h后再進(jìn)行下一步處理,不建議放置培養(yǎng)箱過夜后處理;

2

將培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)所有培養(yǎng)基轉(zhuǎn)入無菌離心管,1200rpm離心3min收集細(xì)胞;

3

去掉上清,用PBS重懸細(xì)胞(以手搖離心管的方式重懸,不要用移液槍吹),將細(xì)胞收集到一個(gè)離心管中,再次1200rpm離心3min;

4

去掉上清,加入1mL左右0.25%胰酶重懸細(xì)胞(還是以手搖離心管的方式混勻,不要吹細(xì)胞), 放入培養(yǎng)箱消化2min;

5

消化2min后,加入5mL完-全培養(yǎng)基混勻終止消化,用移液槍輕輕吹打細(xì)胞懸液,使細(xì)胞團(tuán)分散,1200rpm離心3min;

6

去掉上清,加入6mL左右細(xì)胞相應(yīng)的完-全培養(yǎng)基混勻,視細(xì)胞量決定是1:2傳代-還是1:3傳代(由于細(xì)胞運(yùn)輸有損傷,首-次傳代建議比平時(shí)養(yǎng)密度稍高);

7

顯微鏡下觀察細(xì)胞是否有分散成單顆現(xiàn)象,若有明顯很大的細(xì)胞團(tuán)需要重復(fù)上述步驟二次消化;

8

第二天及時(shí)觀察細(xì)胞貼壁情況,若貼壁細(xì)胞量過多,造成細(xì)胞堆積,貼壁24h后再次傳代分瓶,若密度正常則繼續(xù)生長(zhǎng),不建議換液,貼壁48h后換液去掉不能貼壁的細(xì)胞。


培養(yǎng)注意事項(xiàng)


細(xì)胞貼壁松散,操作時(shí)應(yīng)輕拿輕放;


培養(yǎng)時(shí)可將培養(yǎng)瓶/皿進(jìn)行包被;


PBS潤(rùn)洗時(shí)動(dòng)作應(yīng)緩慢,避免沖走細(xì)胞;


細(xì)胞傳代第二天可能有輕微聚團(tuán)現(xiàn)象,再長(zhǎng)一天能長(zhǎng)開,不建議傳代第二天換液,以免損失細(xì)胞。




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