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細胞學堂 | 脫落的293T細胞如何恢復正常

更新時間:2023-02-16  |  點擊率:1307





293T [HEK-293T](人胚腎細胞)是293 [HEK-293]細胞株插入了SV40 T-antigen的溫度敏感基因形成的高轉衍生株。該細胞廣泛應用于病毒包裝,因其比較容易轉染,也是常用的表達研究外源基因的細胞株。

圖1. 293T正常生長圖片


該細胞因為貼壁松散,若購買常溫細胞,收貨時有可能大部分細胞脫離培養瓶壁,顯微鏡下找不到細胞,只能看到肉眼可見的細胞團,是正?,F象(如圖2)。


圖片

圖2. 293T收貨聚團(圖由客戶提供,僅供學習參考)


參照以下方式處理即可恢復正常:

1

收到細胞后請先置于培養箱中穩定2 ~ 4h后再進行下一步處理,不建議放置培養箱過夜后處理;

2

將培養瓶內所有培養基轉入無菌離心管,1200rpm離心3min收集細胞;

3

去掉上清,用PBS重懸細胞(以手搖離心管的方式重懸,不要用移液槍吹),將細胞收集到一個離心管中,再次1200rpm離心3min;

4

去掉上清,加入1mL左右0.25%胰酶重懸細胞(還是以手搖離心管的方式混勻,不要吹細胞), 放入培養箱消化2min;

5

消化2min后,加入5mL完-全培養基混勻終止消化,用移液槍輕輕吹打細胞懸液,使細胞團分散,1200rpm離心3min;

6

去掉上清,加入6mL左右細胞相應的完-全培養基混勻,視細胞量決定是1:2傳代-還是1:3傳代(由于細胞運輸有損傷,首-次傳代建議比平時養密度稍高);

7

顯微鏡下觀察細胞是否有分散成單顆現象,若有明顯很大的細胞團需要重復上述步驟二次消化;

8

第二天及時觀察細胞貼壁情況,若貼壁細胞量過多,造成細胞堆積,貼壁24h后再次傳代分瓶,若密度正常則繼續生長,不建議換液,貼壁48h后換液去掉不能貼壁的細胞。


培養注意事項


細胞貼壁松散,操作時應輕拿輕放;


培養時可將培養瓶/皿進行包被;


PBS潤洗時動作應緩慢,避免沖走細胞;


細胞傳代第二天可能有輕微聚團現象,再長一天能長開,不建議傳代第二天換液,以免損失細胞。




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